研究人员利用小鼠的单倍体ES细胞(只有一个染*体组),成功培育出转基因小鼠。其主要技术流程如图所示,请分析回答...
问题详情:
研究人员利用小鼠的单倍体ES细胞(只有一个染*体组),成功培育出转基因小鼠。其主要技术流程如图所示,请分析回答下列问题:
注:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种识别序列均不相同的限制酶。箭头指向的位置为限制酶的切割位置:Ampr是氨芐青霉素抗*基因,Neor是G418抗*基因。
(1)利用PCR技术可以扩增目的基因,PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物以外,还应含有________;引物应选用下图中的________(填图中标号)。
(2)在基因工程*作步骤中,过程①②称为________。已知氨芐青霉素不能有效杀死小鼠细胞,而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neor的小鼠细胞。结合上图推测,过程①选用的2种限制酶是________(填图中编号),③处的培养液应添加________(填“氨芐青霉素”或“G418”)。
(3)细胞乙与________类似,图中桑椹胚需通过________技术移入*小鼠子宫内继续发育,进行该*作前需对受体小鼠进行________处理。
【回答】
Taq酶(或耐高温的DNA聚合酶) A和D 基因表达载体的构建 Ⅰ和Ⅱ G418 受精卵 胚胎移植 同期发情
【解析】
PCR反应的条件:模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物、耐高温的DNA聚合酶,其中,dNTP的作用是合成DNA的原料、提供能量。
基因工程的*作步骤为:
提取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。
【详解】
(1)根据分析可知,PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物以外,还应含有耐高温的DNA聚合酶。为了扩增目的基因的片段,根据图示可知需要在引物A和D作用下以目的基因的两条链为模板合成子代目的基因。
(2)由图可知,过程①②是将目的基因和运载体连接形成重组质粒,即基因表达载体的构建过程。重组质粒上的抗生素抗*基因可作为标记基因,其作用是有利于筛选出含有目的基因的细胞。根据题意可知,氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞,而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo′的小鼠细胞,因此应选择Neo′作为标记基因,即质粒上Neo′不能用限制酶切割,则过程①应选用Ⅰ和Ⅱ两种限制酶,图中③处的培养液应添加G418以便于起到筛选的作用。
(3)处理形成的细胞乙与受精卵类似,应用早期胚胎培养技术可以使其发育成桑椹胚。再将桑椹胚通过胚胎移植技术移入*小鼠子宫内继续发育,进行该*作前需对受体小鼠进行同期发情处理,以保*供体与受体处于相同或相近的生理状态。
【点睛】
本题考查了基因工程的有关知识,要求考生能够图示和题干信息确定合适的限制酶,再结合所学知识准确答题。
知识点:DNA和蛋白质技术
题型:填空题
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