酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废*醇作为碳源进行培养，这样既...

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 酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废*醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为*作流程，请回答下列问题：

（1）配制培养基时，按照培养基*准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的        ，及时对培养基进行分装，并进行        灭菌。

（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约        （在25 ℃、50 ℃或80 ℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。

（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有        。

a．为保*无菌*作，接种针、接种环使用前都必须灭菌

b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落

c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中*醇的含量

d．可以通过逐步提高培养基中*醇的浓度，获得*醇高耐受株

（4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保*充足的营养和        供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染*，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上        *细胞的个数应不少于        ，才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。

【回答】

（8分）

（1）pH  高压蒸汽（湿热）

（2）50 ℃

（3）a、b、d

（4）氧气    无    30

【解析】【分析】配制培养基的*作步骤为称量→溶化→定容→调pH→培养基的分装→包扎→灭菌。据图分析，从土壤样品中分离该类酵母菌的实验流程为：称量土壤→梯度稀释→平板浇注分离→划线纯化→扩大培养。

【详解】（1）配制培养基的*作步骤为称量→溶化→定容→调pH→培养基的分装→包扎→灭菌，因此微生物的培养基配制好后应该先调节pH，再分装。常见的灭菌方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌。培养基适宜用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。

（2）在步骤③中，待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板。

（3）在划线过程中，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防止杂菌污染，a正确；划线时应避免划破培养基表面，否则将不能形成正常菌落，b正确；该实验的目的是获得利用工业废*醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的*醇含量，c错误；培养基中的*醇浓度越高，此种培养基中得以生存的酵母菌利用*醇的能力越强，因此可以通过逐步提高培养基中*醇的浓度，获得*醇高耐受株，d正确。

（4）酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保*充足的营养和氧气供应；台盼蓝是大分子物质，不能将活细胞染*，再根据25×16型的血球计数板：1毫升悬液中待测标本（菌体）总数=80小方格内菌体数/80×400×104×稀释倍数。而台盼蓝与菌液等体积加入，因此要达到每毫升3×109个活细胞的预期密度，理论上无*细胞数应该不少于（3×109）÷（1000×2×104×400÷80）=30个。

【点睛】解答本题的关键是掌握微生物的培养基配制过程、灭菌、接种等，并能够利用公式计算血细胞计数板中活菌的数目。

知识点：微生物的利用

题型：综合题