GDNF是一种神经营养因子,对损伤的神经细胞具有营养和保护作用.研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1...
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GDNF是一种神经营养因子,对损伤的神经细胞具有营养和保护作用.研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究.请回答: (1)构建含GDNF基因的表达载体时,需选择图1中的 限制酶进行酶切. (2)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接,连接产物经筛选得到的载体主要有3种:单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示).为鉴定这3种连接方式,选择HpaⅠ酶和BamHⅠ酶对筛选得到的载体进行双酶切,并对酶切后的DNA片段进行电泳分析,结果如图2所示.图中第 泳道显示所鉴定的载体是正向连接的. (3)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后,为了检测GDNF基因是否成功表达,可用相应的 体与提取的蛋白质杂交.当细胞培养的神经干细胞达到一定密度时产生接触抑制,换瓶后进行 培养以得到更多数量的细胞,用于神经干细胞移植治疗实验. (4)对于神经干细胞可以来源于胚胎干细胞的诱导分化,胚胎干细胞来源于 ,在培养时可以只*不分化,但是通过诱导可以分化成各种不同的组织细胞,胚胎干细胞的这个特*称为 . (5)胚胎干细胞也可以来自于核移植的重组细胞,一般体细胞核移植要比胚胎细胞核移植难度大,原因是 ,而取自卵巢的卵母细胞需要培养到 期,才可进行核移植.
【回答】
解:(1)质粒上有XhoⅠ识别位点,而且在启动子之后,所以选用XhoⅠ限制酶进行酶切. (2)泳道①仅有一种条带,属于载体自连;泳道②有两种条带,且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同,为正向连接;泳道③有两种条带,长度与BamHⅠ酶切后结果相同,为反向连接. (3)检测基因是否表达采用抗原抗体杂交法.培养动物细胞采用动物细胞培养法,当细胞密度达到一定程度,需要进行分瓶,进行传代培养. (4)对于神经干细胞可以来源于胚胎干细胞的诱导分化,胚胎干细胞来源于原始*腺和早期胚胎,在培养时可以只*不分化,但是通过诱导可以分化成各种不同的组织细胞,胚胎干细胞的这个特*称为发育的全能*. (5)胚胎干细胞也可以来自于核移植的重组细胞,一般体细胞核移植要比胚胎细胞核移植难度大,原因是细胞分化程度大,细胞核不易实现全能*,而取自卵巢的卵母细胞需要培养到MⅡ中期期,才可进行核移植. 故*为: (1)XhoⅠ (2)② (3)抗体 传代 (4)原始*腺和早期胚胎 发育的全能* (5)细胞分化程度大,细胞核不易实现全能* MⅡ中期
知识点:胚胎工程
题型:填空题
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