SARS冠状病毒(SARS-CoV)的N蛋白是一种重要的结构蛋白,位于病毒颗粒的核心部分,并与病毒RNA结合。...
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SARS冠状病毒(SARS-CoV)的N蛋白是一种重要的结构蛋白,位于病毒颗粒的核心部分,并与病毒RNA结合。在病毒的包装等过程中起重要作用。因此制备抗SARS-CoVN蛋白的单克隆抗体(mAb),对于诊断和治疗疾病具有重要意义。用SARS-CoV制备单克隆抗体的流程如下图:
(1)为了获得大量的SARS冠状病毒N蛋白目的基因,可以采用PCR技术在体外扩增,该技术还需要dNTP、_______酶以及引物等,扩增三轮需要的引物数量为___________个。
(2)若双链DNA几乎具有等量的净电荷,且在高于等电点的pH溶液中带负电荷。利用琼脂糖凝胶电泳进行分离和纯化DNA分子主要依据_______不同,采用外加电场使其分开。在电泳槽中还需要加入______作为参照物进行鉴定。
(3)小鼠被抗原蛋白免疫后,可以从___________中获取细胞Ⅰ。细胞Ⅰ中可能包含多种能产生抗体的细胞,原因是______________________。
(4)为了分离出只能产生mAb的细胞Ⅱ,需要用___________技术对杂交瘤细胞进行筛选。目前可将图中的___________作为疫苗,预防SARS冠状病毒引发的疾病。
【回答】
Taq(耐高温DNA聚合) 14 分子量(大小) 标准DNA 脾脏 小鼠曾经接触过其他抗原 抗体检测(抗原—抗体杂交) SARS冠状病毒的N蛋白
【解析】由图可知,提取相关mRNA,通过逆转录过程可形成SARS冠状病毒(SARS-CoV)的N蛋白的目的基因,将该目的基因构建基因表达载体后导入人胚肺成纤维细胞,在该细胞中生产SARS冠状病毒(SARS-CoV)的N蛋白。将此蛋白注*到小鼠体内,可引起小鼠发生特异*免疫,产生能够分泌与SARS冠状病毒(SARS-CoV)的N蛋白结合的抗体的浆细胞,将此浆细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,经过培养和筛选可获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞,在体外培养该细胞,即可得到单克隆抗体(mAb)。
【详解】(1)PCR过程需要耐高温的DNA聚合酶,即Taq酶,第一次循环要1对引物,第二次要2对,第三次需要4对,扩增三轮总共需要7对也就是14个引物。
(2)由于双链DNA几乎具有等量的净电荷,且在高于等电点的pH溶液中带负电荷。所以利用琼脂糖凝胶电泳分离纯化DNA主要是依据不同DNA的分子量不同,在电泳槽中还需要加入标准DNA作为参照物。
(3)小鼠被抗原蛋白免疫后,从产生免疫反应的小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞也就是细胞I。因为小鼠曾经接触过其他抗原,所以细胞I可能包含多种能产生抗体的细胞。
(4)为了分离出只能产生mAb的细胞II,可用抗原抗体杂交技术对杂交瘤细胞进行筛选,目前可以将图中的SARS冠状病毒的N蛋白作为疫苗,预防SARS冠状病毒引发的疾病。
【点睛】
本题是利用基因工程和细胞工程生产单克隆抗体的过程,意在考查考生对所学知识的理解和应用能力。
知识点:DNA和蛋白质技术
题型:综合题
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