血管内皮生长因子(VEGF)能促进眼部视网膜血管的病理*生长。临床上可用VEGF抗体的Fab片段(即抗体的活*...
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血管内皮生长因子( VEGF)能促进眼部视网膜血管的病理*生长。临床上可用VEGF抗体的Fab片段(即抗体的活*片段)作为*物治疗视网膜病变。以下是利用大肠杆菌来大量合成该抗体片段的技术路线图,请回答下列问题:
(1)图中的质粒在基因工程中常作为 ,抗卡那霉素基因和抗四环素基因当作 。其中的核心步骤是 (填图中标号)
(2)科学家已经测出VEGF的抗体Fab片段的氨基*序列,因此可以通过 方法来获取目的基因。获取目的基因后,还需要在其两端加上限制酶HindⅢ和XhoⅠ识别序列和启动子T7等序列,T7的位置应该在 (填l、 2 3或4)处。
(3)大肠杆菌常用 处理,使之成为 细胞,以便吸收外源DNA;与重组质粒混合培养一段时间后,用分别添加卡那霉素和四环素的培养基进行筛选;如果大肠杆菌在添加卡那霉素的培养基中 ,在添加四环素的培养基中 ,则为需要的目的菌株。
(4)对筛选出的大肠杆菌中目的基因是否成功表达,可以用 技术进行检测。即用 与提取出的蛋白质杂交来鉴定是否合成抗体Fab片段蛋白。
【回答】
(1)(运)载体 标记基因 ①
(2)人工合成(化学合成) 2或3 (答“2”或“3”均给分)
(3)Ca2+ (或CaCl2) 感受态 能生长(或“能形成菌落”) 不能生长(或“不能形成菌落”)
(4)抗原-抗体杂交 血管内皮生长因子(VEGF)
知识点:生物技术的安全*和伦理问题
题型:填空题
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