微生物的生长繁殖需要不同种类的碳源、氮源、无机盐、生长因子等营养物质，若培养基中的某种营养物质不能被微生物利用...

问题详情：

微生物的生长繁殖需要不同种类的碳源、氮源、无机盐、生长因子等营养物质，若培养基中的某种营养物质不能被微生物利用，微生物便不能生长。根据这一特*，可将微生物接种在只缺少某种营养物质的基础培养基中，再将所缺的营养物质点植于平板上，该营养物质便逐渐扩散于植点周围。该微生物若需要此种营养物质，便在这种营养物质扩散处生长繁殖，形成肉眼可见的菌落圈，这种测定微生物营养需求的方法称为生长谱法。某兴趣小组尝试用生长谱法测定某种大肠杆菌对糖类（碳源）的需求情况，*作流程如下：

Ⅰ．培养基的制备。该小组所用无碳培养基*如下（加水定容至1L）：

同时配制质量分数为10%的葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖溶液各50mL。

Ⅱ．将大肠杆菌悬液与溶化并冷却至50℃的固体培养基混匀，倒平板。

Ⅲ．将已凝固的平板背面用记号笔划分为四个区，并注明要点植的糖类名称。

Ⅳ．通过无菌*作分别加入蘸有不同糖类的无菌滤纸片，待平板吸收干燥后倒置培养24小时。

结合所学知识回答相关的问题：

（1）无碳培养基*中加入（NH4）2SO4的目的是___________。对培养基及糖溶液通常采用的灭菌方法是___________。倒平板后用___________法进行接种。

（2）该小组发现最终在培养基的四个区内均有菌落圈产生，但大小不同，据此得到的初步结论是___________。

（3）如果在此实验中发现某一不被该大肠杆菌利用的碳源的点植区域也长出菌落圈，试分析可能的原因（写出2条即可）______。

（4）生长谱法还可用于某些营养缺陷型菌株（失去合成某种生长因子能力的菌株）的筛选和鉴定，例如大肠杆菌经紫外线诱变处理后会产生一些营养缺陷型突变个体，现已纯化并制备出某营养缺陷型的菌悬液，但不清楚是氨基*缺陷型、维生素缺陷型还是氨基*—维生素缺陷型，请简要写出用生长谱法进行鉴定的思路，并预期可能的结果及结论_____。

【回答】

    (1). 提供氮源    (2). 高压蒸汽灭菌    (3). 稀释涂布平板    (4). 大肠杄菌可以利用四种糖类（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖）作为碳源，但利用的程度不同    (5). 有杂菌混入；该大肠杆菌发生了突变；该大肠杆菌可能会利用琼脂多糖    (6). 将菌悬液与溶化并冷却至50℃的不含氨基*和维生素的基础培养基混匀，倒平板；将培养基划分成两个相等的区域A、B；A区点植氨基*、B区点植维生素；在适宜温度下培养，观察菌落产生的区域。若菌落只在A区产生，则为氨基*缺陷型；若菌落只在B区产生，则为维生素缺陷型；若菌落产生在AB交界处，则为氨基*—维生素缺陷型

【解析】

培养基一般含有水、碳源、氮源、无机盐等。

常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。

【详解】（1）培养基中的（NH4）2SO4可以提供氮源。常用高压蒸汽灭菌法对培养基及糖溶液进行灭菌。倒平板后常用稀释涂布平板法进行接种。

（2）培养基的四个区中含有不同的糖类，若在培养基的四个区内均有菌落圈产生，说明大肠杆菌可以利用四种糖类，但大小不同，说明大肠杆菌对四种糖类的利用程度不同。

（3）如果在此实验中发现某一不被该大肠杆菌利用的碳源的点植区域也长出菌落圈，可能是有杂菌混入或该大肠杆菌发生了突变。

（4）要通过生长谱法探究大肠杆菌属于氨基*缺陷型、维生素缺陷型还是氨基*—维生素缺陷型，可以将菌悬液与溶化并冷却至50℃的不含氨基*和维生素的基础培养基混匀，倒平板；将培养基划分成两个相等的区域A、B；A区点植氨基*、B区点植维生素；在适宜温度下培养，观察菌落产生的区域。若菌落只在A区产生，则为氨基*缺陷型；若菌落只在B区产生，则为维生素缺陷型；若菌落产生在AB交界处，则为氨基*—维生素缺陷型。

【点睛】本题的难点在于通过生长谱法探究大肠杆菌属于氨基*缺陷型、维生素缺陷型还是氨基*—维生素缺陷型，选择的培养基应该不含氨基*和维生素，在两个区分别点上氨基*和维生素，观察菌落的产生情况。

知识点：微生物的利用

题型：综合题