P450是石油降解的关键酶。用SalI和NdeI联合酶切获得P450基因,与*图所示的质粒重组后,导入大肠杆菌...
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P450是石油降解的关键酶。用SalI和NdeI联合酶切获得P450基因,与*图所示的质粒重组后,导入大肠杆菌中获得基因工程菌。*图中mel基因表达能使白*菌落变成黑*,aacCI是庆大霉素(抗生素)抗*基因。*图中箭头位置是不同限制酶的切割位点,乙图表示几种限制酶对应的识别序列及切割位点。回答下列问题:
(l)*图所示质粒中没有Sal I酶的切割位点,切割质粒时可用乙图中的_____________酶代替,原因是________________。酶切后的质粒与目的基因(P450基因)在__________酶的作用下形成重组质粒。
(2)经测定图*质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对),重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6.0kb和1.2kb的两个片段,据此推测,目的基因的长度应为__________kb。基因表达载体中必须含有启动子,它的作用是__________________。
(3)将重组质粒导人大肠杆菌时,常用Ca2+处理大肠杆菌,使细胞处于一种_____________的生理状态,这种细胞称为感受态细胞。由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低,需要接种到含有________的固体培养基上,选择颜*为_____________的菌落扩大培养,进而筛选出所需的工程菌。
【回答】
(1)XhoI SalI和XhoI作用于原质粒所产生的粘*末端相同 DNA连接 (2)1.4 RNA聚合酶识别并结合位点 (3)能吸收周围环境中DNA分子 庆大霉素 白*
【解析】 (l)*图所示质粒中没有SalI酶的切割位点,切割质粒时可用乙图中的Xho I酶代替,二者作用后可形成相同的黏*末端。酶切后的质粒与目的基因(P450基因)可在DNA连接酶的作用下形成重组质粒。(2)图*质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对),据图*可知,用Xho I和NdeI联合酶切处理质粒,去除的片段应为1.8kb,剩余的DNA片段为5.8kb,重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6.0kb和1.2kb的两个片段,说明重组质粒长度为6.0+1.2=7.2kb,则目的基因的长度应为7.2—5.8=1.4kb。基因表达载体中启动子是RNA聚合酶的结合部位,可以启动转录过程。(3)将重组质粒导人大肠杆菌时,常用Ca2+处理大肠杆菌,使细胞壁的通透*增大,使之容易吸收周围环境中DNA分子。据图可知,目的基因的*入会破坏mel基因,但不会破坏庆大霉素(抗生素)抗*基因,因此可将受体细胞接种到含有庆大霉素的固体培养基上,含有重组质粒的大肠杆菌形成的菌落不会变成黑*,但具有庆大霉素抗*,选择颜*为白*的菌落扩大培养,可筛选出所需的工程菌。
知识点:生物技术的安全*和伦理问题
题型:综合题
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