大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中,如果没有*...
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大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中,如果没有*入外源基因,LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶。当培养基中含有IPTG和Xgal时,Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝*,大肠杆菌将形成蓝*菌落。反之,则形成白*菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。请分析并回答问题。
(1)对已获得的目的基因可利用________技术进行扩增。
(2)目的基因*入质粒构建重组质粒的过程中,需要DNA连接酶恢复________键。
(3)将试管Ⅰ中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是________;大肠杆菌需事先用Ca2+进行处理,目的是________________。
(4)将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上培养,培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质________和生长因子,还应加入IPTG、Xgal以及氨苄青霉素,其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出________。
(5)若观察到培养基上出现________*菌落,则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因,则不利于重组质粒的筛选,原因是__________________________。
【回答】
* (1)PCR
(2)**二酯
(3)进行转化 使大肠杆菌细胞处于感受态
(4)碳源、氮源、无机盐、水 导入pUC18质粒的大肠杆菌
(5)白 无论大肠杆菌中是否导入重组质粒,均会呈现蓝*菌落
知识点:细胞工程
题型:填空题
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