植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质,如半纤维素多聚糖、果胶质(富含有半乳糖醛*的多聚糖)等。研究人...
问题详情:
植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质,如半纤维素多聚糖、果胶质(富含有半乳 糖醛*的多聚糖)等。研究人员通过基因工程、胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因(manA)猪,主要流程如下 图(neo 为新霉素抗*基因)。
(1)将该重组质粒成功导入受体细胞后,经培养,发现约有 50%的细胞能正常表达目的基因产物,原因是____________________________________________。通过①过程获得的重组质粒含有 4.9 kb 个碱基对,其中 manA 基因含有 1.8 kb 个碱基对。若用 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ联合酶切割其中一种重组质粒,只能获得 1.7 kb 和 3.2 kb 两种 DNA 片段,若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒,则可获得__________kb 长度两种的 DNA 片段。
(2)图 2 中,猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养 10 代以内的细胞,原因是_____________________,猪的卵母细胞一般要培养到__________期。
(3)在④过程的早期胚胎培养时,通常需要定期更换培养液,目的是______________________________________________,一般培养到__________阶段,可向受体移植。
(4)⑤过程前,通常需对受体母猪注*孕激素,对其进行__________处理。
【回答】
目的基因与质粒连接时,存在正向连接和反向连接两种重组质粒 3.5和1.4 保持正常的二倍体核型,遗传物质不变 MⅡ中(或“减数第二次*中”) 清除代谢废物(减少代谢废物对细胞的毒害,补充营养) 桑椹胚或囊胚 同期发情
【分析】
分析题图:①为基因表达载体的构建、②为将目的基因导入受体细胞、③为体细胞核移植、④为早期胚胎培养、⑤为胚胎移植。
【详解】
(1)由图1可知,BamH I和Bgl Ⅱ切割产生的粘*末端相同,用这两种限制酶切割目的基因和质粒后,构建基因表达载体时会出现正向连接和反向连接两种重组质粒,故有50%的细胞能正常表达目的基因产物,剩下部分不能正常表达目的基因产物。由于BamH I和Bgl Ⅱ切割产生的粘*末端连接后,不能被BamH I或Bgl Ⅱ识别切割,只有BamH I切割的粘*末端经过连接后可以被BamH I识别切割,故重组质粒只有1个BamH I识别位点和1个EcoR I识别位点。重组质粒存在正向连接和反向连接两种类型,若用BamH I和EcoR I联合酶切其中一种重组质粒,只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段,说明右侧BamH I和EcoR I之间的长度为1.7;用联合酶切同等长度的另一种重组质粒,则切割的是BamH I左侧的位点,又因为manA基因含有1.8kb个碱基对,可获得1.7+1.8=3.5kb和4.9-3.5=1.4kb两种DNA片段。
(2)猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养10代以内的细胞,原因是保持了正常二倍体核型,遗传物质不变。细胞在传至10~50代时,增殖会逐渐缓慢,以至于完全停止,这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。在核移植时采集的卵母细胞,在体外培养到MⅡ中期(或“减数第二次*中期”)才进行去核*作,因为减数第二次*中期的卵母细胞体积大、易*作,营养物质丰富,细胞质中含有促进细胞核全能*表达的物质。
(3)在早期胚胎培养过程中,应定期更换培养液,清除代谢废物,补充营养物质。胚胎一般培养到桑椹胚或囊胚阶段,可向受体移植。
(4)过程⑤为胚胎移植,胚胎移植前,通常需对受体母猪注*孕激素,使其能同期发情,目的是使供体和受体生殖器官的生理状态相同,为供体的胚胎移入受体提供相同的生理环境。
【点睛】
解答本题的关键是掌握基因工程的相关知识、核移植技术和胚胎移植技术,并能够分析和判断图中各个字母代表的过程的名称,结合题目的提示分析答题。
知识点:基因工程
题型:综合题
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