[生物-现代生物科技专题]必答题(10分)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(...
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[生物-现代生物科技专题]必答题(10分)
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的_______________________。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到_______________________期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以根据Rag2基因的_______________________设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PsⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有_______________________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_______________________,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
【回答】
【*】(10分)
(1)细胞核
(2)囊胚
(3)核苷*序列 HindⅢ和PstⅠ
(4)蛋白质
【解析】(1)步骤①是核移植过程。体细胞核移植前要除去受体卵母细胞的细胞核,原因是若不去掉卵母细胞的细胞核,就会造成细胞里面就有两个细胞核,使得遗传物质是不稳定的。
(2)ES细胞是由早期胚胎(囊胚)的内细胞团分离出来的一类细胞。
(3)步骤③过程是导入目的基因——Rag2基因于ES细胞中的基因表达载体的构建过程。在生物体外可通过PCR技术扩增目的基因,其条件是模板DNA、Rag2基因的核苷*序列设计引物、四种脱氧核苷*、热稳定DNA聚合酶等,另外根据题干可知,获得Rag2目的基因需要用 HindⅢ和PstⅠ两种限制酶,所以在构建表达载体时,所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点。
(4)检测目的基因是否翻译相应蛋白质时,应采用抗原—抗体杂交(免疫)法,即提取蛋白质,用相应的抗体进行抗体—抗原杂交,看是否有杂交带。
知识点:胚胎工程
题型:填空题
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